一，普通光學顯微鏡的主要構造

　　普通光學顯微鏡的構造主要分為三部分：機械部分、照明部分和光學部分。顯微鏡各部分構造如下圖：

　　1.機械部分

　　（1）鏡座：是顯微鏡的底座，用以支持整個鏡體。

　　（2）鏡柱：是鏡座上面直立的部分，用以連接鏡座和鏡臂。

　　（3）鏡臂：一端連于鏡柱，一端連于鏡筒，是取放顯微鏡時手握部位。

　　（4）鏡筒：連在鏡臂的前上方，鏡筒上端裝有目鏡，下端裝有物鏡轉換器。

　　（5）物鏡轉換器(旋轉器)：接于棱鏡殼的下方，可自由轉動，盤上有3－4個圓孔，是安裝物鏡部位，轉動轉換器，可以調換不同倍數的物鏡，當聽到碰叩聲時，方可進行觀察，此時物鏡光軸恰好對準通光孔中心，光路接通。

　　（6）鏡臺(載物臺)：在鏡筒下方，形狀有方、圓兩種，用以放置玻片標本，中央有一通光孔，我們所用的顯微鏡其鏡臺上裝有玻片標本推進器(推片器)，推進器左側有彈簧夾，用以夾持玻片標本，鏡臺下有推進器調節輪，可使玻片標本作左右、前后方向的移動。

　　（7）調節器：是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，調節時使鏡臺作上下方向的移動。

　　 ①粗調節器(粗螺旋)：大螺旋稱粗調節器，移動時可使鏡臺作快速和較大輻度的升降，所以能迅速調節物鏡和標本之間的距離使物象呈現于視野中，通常在使用低倍鏡時，先用粗調節器迅速找到物象。

　　 ②細調節器(細螺旋)：小螺旋稱細調節器，移動時可使鏡臺緩慢地升降，多在運用高倍鏡時使用，從而得到更清晰的物象，并借以觀察標本的不同層次和不同深度的結構。

　　2．照明部分

　　裝在鏡臺下方，包括反光鏡，集光器。

　　（1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉動，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經通光孔照明標本，凹面鏡聚光作用強，適于光線較弱的時候使用，平面鏡聚光作用弱，適于光線較強時使用。

　　（2）集光器(聚光器)位于鏡臺下方的集光器架上，由聚光鏡和光圈組成，其作用是把光線集中到所要觀察的標本上。

　　①聚光鏡：由一片或數片透鏡組成，起匯聚光線的作用，加強對標本的照明，并使光線射入物鏡內，鏡柱旁有一調節螺旋，轉動它可升降聚光器，以調節視野中光亮度的強弱。

　　②光圈(虹彩光圈)：在聚光鏡下方，由十幾張金屬薄片組成，其外側伸出一柄，推動它可調節其開孔的大小，以調節光量。

　　3.光學部分

　　（1）目鏡：裝在鏡筒的上端，通常備有2－3個，上面刻有5×、10×或15×符號以表示其放大倍數，一般裝的是10×的目鏡。

　　（2）物鏡：裝在鏡筒下端的旋轉器上，一般有3－4個物鏡，其中*短的刻有“10×”符號的為低倍鏡，較長的刻有“40×”符號的為高倍鏡，*長的刻有“100×”符號的為油鏡，此外，在高倍鏡和油鏡上還常加有一圈不同顏色的線，以示區別。

　　在物鏡上，還有鏡口率(N.A.)的標志，它反應該鏡頭分辨力的大小，其數字越大，表示分辨率越高， 各物鏡的鏡口率如下表：

　　物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm)

　　10× 0.25 5.40

　　40× 0.65 0.39

　　100× 1.30 0.11

　　 表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(物象調節清楚)時物鏡的下表面與蓋玻片(蓋玻片的厚度一般為0.17mm)上表面之間的距離，物鏡的放大倍數愈大，它的工作距離愈小。

　　顯微鏡的放大倍數是物鏡的放大倍數與目鏡的放大倍數的乘積，如物鏡為10×，目鏡為10×，其放大倍數就為10×10=100。

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　　4，成像系統 在使用過程中，為了方便觀察，通常會在光學顯微鏡目鏡上加裝成像系統，將顯微鏡視野內的圖像通過成像系統傳送到電子顯示屏上，更好地對顯微鏡視野內的標本進行觀察。如下圖所示：

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　　二，水浸片的制作

　　 在水產疾病的診斷過程中，使用得*多的是將病料組織制成水浸片，放在載物臺上觀察，詳細的制作步驟如下：

　　 取一塊干凈的載玻片，在上面滴一滴清水（如果是利用與水直接接觸的組織或器官制作水浸片，淡水品種就使用淡水，海水品種就使用海水，如果是利用不與水接觸的組織器官制作水浸片，則要使用生理鹽水），首先從要檢查的部位取一小塊組織，至于載玻片的水滴中，用鑷子夾住輕輕攪動，讓其分散，再取一潔凈的蓋玻片將其一邊與載玻片接觸，傾斜著將蓋玻片輕蓋在待檢組織上，再用鑷子或鉛筆輕壓，讓待檢組織分散。如果水過多，可以用紗布或吸水紙吸去蓋玻片周圍多余的水。這樣，一個水浸片就制成了。

　　 在制作水浸片的過程中，要注意以下幾點：

　　 1，所取的待檢組織的樣品不宜過多，過多容易引起透光率的不良，影響顯微鏡的觀察。

　　 2，必須先滴水，再放組織，否則會產生氣泡，影響觀察。

　　 3，水產動物不與水接觸的組織器官要用生理鹽水，否則檢查的病原體會由于滲透壓的不同引起碎裂，皺縮或死亡而影響診斷。

　　 4，水浸片要現場制作，不宜保存。

　　三，普通光學顯微鏡的使用步驟。

　　1、實驗時要把顯微鏡放在座前桌面上稍偏左的位置，鏡座應距桌沿 6～7 cm左右。

　　2、打開光源開關，調節光強到合適大小。

　　3、轉動物鏡轉換器，使低倍鏡頭正對載物臺上的通光孔。先把鏡頭調節至距載物臺1～2cm左右處，然后用左眼注視目鏡內，接著調節聚光器的高度，把孔徑光闌調至*大，使光線通過聚光器入射到鏡筒內，這時視野內呈明亮的狀態。

　　4、將所要觀察的玻片放在載物臺上，使玻片中被觀察的部分位于通光孔的正中央，然后用標本夾夾好載玻片。

　　5、先用低倍鏡觀察（物鏡10X、目鏡10X）。觀察之前，先轉動粗動調焦手輪，使載物臺上升，物鏡逐漸接近玻片。需要注意，不能使物鏡觸及玻片，以防鏡頭將玻片壓碎。然后，左眼注視目鏡內，同時右眼不要閉合（要養成睜開雙眼用顯微鏡進行觀察的習慣，以便在觀察的同時能用右眼看著繪圖），并轉動粗動調焦手輪，使 載物臺慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。

　　6、如果在視野內看到的物像不符合實驗要求（物像偏離視野），可慢慢調節載物臺移動手柄。調節時應注意玻片移動的方向與視野中看到的物像移動的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以調節微動調焦手輪，直至物像清晰為止。

　　7、如果進一步使用高倍物鏡觀察，應在轉換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉換成高倍物鏡觀察時，視野中的物像范圍縮小了很多）。一般具有正常功能的顯微鏡，低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦，在用低倍物鏡觀察清晰時，換高倍物鏡應可以見到物像，但物像不一定很清晰，可以轉動微動調焦手輪進行調節。

　　8、在轉換高倍物鏡并且看清物像之后，可以根據需要調節孔徑光闌的大小或聚光器的高低，使光線符合要求（一般將低倍物鏡換成高倍物鏡觀察時，視野要稍變暗一些，所以需要調節光線強弱）。

　　9、觀察完畢應先將物鏡鏡頭從通光孔處移開，然后將孔徑光闌調至*大，再將載物臺緩緩落下，并檢查零件有無損傷，特別要注意檢查物鏡是否沾水沾油，如沾了水或油要用鏡頭紙擦凈，檢查處理完畢后即可鋪上防塵布。

　　四，顯微鏡不同倍數鏡頭的使用方法

　　1．低倍鏡的使用方法

　　（1）取鏡和放置：顯微鏡平時存放在柜或箱中，用時從柜中取出，右手緊握鏡臂，左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上，鏡座后端距桌邊1－2寸為宜，便于坐著操作。

　　（2）對光：用拇指和中指移動旋轉器(切忌手持物鏡移動)，使低倍鏡對準鏡臺的通光孔(當轉動聽到碰叩聲時，說明物鏡光軸已對準鏡筒中心)。打開光圈，上升集光器，并將反光鏡轉向光源，以左眼在目鏡上觀察(右眼睜開),同時調節反光鏡方向，直到視野內的光線均勻明亮為止。

　　（3）放置玻片標本：取一玻片標本放在鏡臺上，一定使有蓋玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉推片器螺旋，將所要觀察的部位調到通光孔的正中。

　　（4）調節焦距：以左手按逆時針方向轉動粗調節器，使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標本片約5毫米處，應注意在上升鏡臺時，切勿在目鏡上觀察。一定要從右側看著鏡臺上升，以免上升過多，造成鏡頭或標本片的損壞。然后，兩眼同時睜開，用左眼在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉動粗調節器，使鏡臺緩慢下降，直到視野中出現清晰的物象為止。

　　 如果物象不在視野中心，可調節推片器將其調到中心(注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的)。如果視野內的亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調節，如果在調節焦距時，鏡臺下降已超過工作距離(>5.40mm)而未見到物象，說明此次操作失敗，則應重新操作，切不可心急而盲目地上升鏡臺。

　　2．高倍鏡的使用方法

　　（1）選好目標：一定要先在低倍鏡下把需進一步觀察的部位調到中心，同時把物象調節到*清晰的程度，才能進行高倍鏡的觀察。

　　（2）轉動轉換器，調換上高倍鏡頭，轉換高倍鏡時轉動速度要慢，并從側面進行觀察(防止高倍鏡頭碰撞玻片)，如高倍鏡頭碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調好，應重新操作。

　　（3）調節焦距：轉換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能見到一個不太清楚的物象，可將細調節器的螺旋逆時針移動約0.5－1圈，即可獲得清晰的物象(切勿用粗調節器!)

　　如果視野的亮度不合適，可用集光器和光圈加以調節，如果需要更換玻片標本時，必須順時針(切勿轉錯方向)轉動粗調節器使鏡臺下降，方可取下玻片標本。

　　3．油鏡的使用方法

　　（1）在使用油鏡之前，必須先經低、高倍鏡觀察，然后將需進一步放大的部分移到視野的中心。

　　（2）將集光器上升到*高位置，光圈開到*大。

　　（3）轉動轉換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉動油鏡，在轉換油鏡時，從側面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。

　　（4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉動細調節器至物象清晰為止。

　　如果不出現物象或者目標不理想要重找，在加油區之外重找時應按：低倍→高倍→油鏡程序。在加油區內重找應按：低倍→油鏡程序，不得經高倍鏡，以免油沾污鏡頭。

　　（5）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。

　　五，顯微鏡使用的注意事項

　　（一）、 正確安裝的問題

　　 使用顯微鏡前，首先要把顯微鏡的目鏡和物鏡安裝上去。目鏡的安裝較為簡單，主要的問題在于物鏡的安裝，由于物鏡鏡頭較貴重，萬一安裝時螺紋沒合好，易摔到地上，造成鏡頭損壞，所以為了保險起見，強調操作者在安裝物鏡時要用左手食指和中指托住物鏡，然后用右手將物鏡裝上去，這樣即使沒安裝好，也不會摔到地上。

　　（二）、正確對光的問題

　　 對光是使用顯微鏡時很重要的一步，有些操作者在對光時，隨便轉一個物鏡對著通光孔，而不是按要求一定用低倍鏡對光。轉動反光鏡時喜歡用一只手，往往將反光鏡扳了下來。所一定要強調用低倍鏡對光，當光線較強時用小光圈、平面鏡，而光線較弱時則用大光圈、凹面鏡，反光鏡要用雙手轉動，當看到均勻光亮的圓形視野為止。光對好后不要再隨便移動顯微鏡，以免光線不能準確地通過反光鏡進入通光孔。

　　（三）、正確使用準焦螺旋的問題

　　 使用準焦螺旋調節焦距，找到物象可以說是顯微鏡使用中*重要的一步，也是操作者感覺*為困難的一步。操作者在操作過程中極易出現以下錯誤：一是在高倍鏡下直接調焦；二是不管鏡筒上升或下降，眼睛始終在往目鏡中看視野；三是不了解物距的臨界值，物距調到2~3厘米時還在往上調，而且轉動準焦螺旋的速度很快。前兩種錯誤結果往往造成物鏡鏡頭抵觸到裝片，損傷裝片或鏡頭，而第三種錯誤則是操作者使用顯微鏡時*常見的一種現象。針對以上錯誤，操作者要注意，調節焦距一定要在低倍鏡下調，先轉動粗準焦螺旋，使鏡筒慢慢下降，物鏡靠近載玻片，但注意不要讓物鏡碰到載玻片，在這個過程中眼睛要從側面看物鏡，然后用左眼朝目鏡內注視，并慢慢反向調節粗準焦螺旋，使鏡筒徐徐上升，直當看到物像為止。一般顯微鏡的物距在1厘米左右，所以如果物距已遠超過1厘米，但仍未看到物像，那可能是標本未在視野內或轉動粗準焦螺旋速度過快，此時應調整裝片位置，然后再重復上述步驟，當視野中出現模糊的物像時，就要換用細準焦螺旋調節，只有這樣，才能縮小尋找范圍，提高找到物像的速度。

　　（四）、物鏡轉換的問題

　　 使用低倍鏡后換用高倍鏡，操作者往往喜歡用手指直接推轉物鏡，認為這樣比較省力，但這樣容易使物鏡的光軸發生偏斜，原因是轉換器的材料質地較軟，精度較高，螺紋受力不均勻很容易松脫。一旦螺紋破壞，整個轉換器就會報廢。操作者應手握轉換器的下層轉動板轉換物鏡。

　　（五）、正確用眼的問題

　　 用顯微鏡觀察物體時，應雙眼同時睜開，左眼往目鏡內注視。但有不少操作者往往做不到這一點，喜歡用手捂住右眼或干脆閉上右眼，這是不符合實驗的觀察要求的，這種不良習慣會造成左眼疲勞，同時也不能做到邊觀察邊畫圖。應該注意，左眼要盡量貼近目鏡，右眼試圖向視野內注視，如此反復訓練，就會達到雙目同時睜開觀察的要求。或者也可以通過做以下練習：睜開雙眼，用一張紙或手掌豎立在兩眼之間，鼻子跟前，使左右眼不能互看對側一邊，然后有意識地先看左邊，再看右邊，如此3~5次，每天早晚各做一遍，不到一星期便可學會。

　　（六）視野內污點判斷的問題

　　轉動目鏡，污點移動則在目鏡上。不移動則不在目鏡上

　　移動玻片，污點移動則在玻片上。不移動則不在玻片上

　　如果視野內的污點不在玻片和目鏡上，那就在物鏡上。

　　（七）顯微鏡視野內玻片的移動與物像的移動

　　由于是倒立的像，玻片的移動方向與物像移動的方向相反。

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　　（八）使用過程中其他需要注意的問題

　　1．持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。

　　2．輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。

　　3．保持顯微鏡的清潔，光學和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。

　　4．水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺，如果沾污應立即擦凈。

　　5．放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。

　　6．要養成兩眼同時睜開的習慣，以左眼觀察視野，右眼用以繪圖。

　　7．不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。

　　8．使用完畢后，必須復原才能放回鏡箱內，其步驟是：取下標本片，轉動旋轉器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器(但不要接觸反光鏡)、關閉光圈，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回實驗臺柜內。*后填寫使用登記表。(注：反光鏡通常應垂直放，但有時因集光器沒提至應有高度，鏡臺下降時會碰壞光圈，所以這里改為平放。