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行業新聞
關于超高倍顯微鏡之爭 - 分析行業新聞
- 作者：微儀顯微鏡
- 發布時間：2023-03-02
- 點擊：239
超高倍率顯微鏡能否檢查泌尿道病原體問題，在醫學檢驗界已經爭論了六、七年。與前些年前相比，不再是一片反對聲了，現在的情況是：凡是使用過或仔細看過超高倍率顯微鏡檢查泌尿道分泌物的單位或個人基本執肯定態度，反之，則可能執懷疑或否定態度。正像朱忠勇老師所說，現在不僅一些小醫院在使用這種顯微鏡，就是很多大的醫療單位也正在或開始用上了這種顯微鏡。據作者在網上看到的資料，05年世界銀行日元和德元貸款支持中國建立、完善“疾病預防控制中心”的部分省市醫療器械招標清單中，從南到北，超高倍顯微鏡就有數百臺之多，可見人們對超高倍顯微鏡的認同程度和其影響力。
*近，全軍醫學檢驗中心，南京軍區福州總醫院朱忠勇老師在中華檢驗醫學雜志撰文對此提出質疑。作為中國**批超高倍顯微鏡研發的參與者，而且目前仍在繼續從事這一領域研究，想就有些問題與朱老師等商榷。
一、首先澄清兩個問題：
1、超高倍顯微鏡*初源于美國斯坦福大學，中國的開發只是避開原創人的**保護，重新設計了光路，連接了計算機系統，使之在國內本土生產，價格大幅度下降。但此種儀器屬新產品，尚無行業標準和國家標準，不少商家競相仿制、濫造，市場上魚目混珠，假貨充斥，非我等的初衷，企業對此也是無可奈何。這么多年來，對超高倍顯微鏡的種種責難和批判，實際是代人受過。正象見網上有的網友評論所言：一本好經給歪和尚唸砸了。
2、當初超高倍顯微鏡進入中國時，是和“末梢血分析”捆綁銷售的，國內開發出來后，考慮到“末梢血分析”是一種檢查方法，沒有**保護，所以就原封不動保留下來，供研究、試用。之后“末梢血分析”在名稱上演變為“一滴血亞健康檢查”，而內容沒有變，說白了，它是美國人研究的健康篩查方法，據我們所知，國內只有極少數人有它的原版培訓教材和掌握其分析技術，目前它也被眾多和尚們唸得不成經了。其實開發超高倍顯微鏡的目的并不是為了推廣一滴血亞健康檢查，而是看到這種顯微鏡有其它廣泛的應用前景。如果有學者對這一塊感興趣或有疑問，請直接上網與美國研究人員交流。談到“2001 年中華醫學會檢驗醫學分會邀請了有關專家和個別該試驗的擁護者，在北京小湯山九華山莊開了一個小范圍的會議。與會專家一致認為該項檢查沒有科學根據；所謂“超高倍顯微鏡”能放大20000倍，有的廠家廣告甚至說可以放大30000～35000倍云云，根本不可能”一事，本人也參加了這次會議，在我的記憶中會議的*后結論是：認為超高倍顯微鏡檢查泌尿生殖道微生物是可行的，并決定召開北戴河專題討論與經驗交流會；對于“一滴血亞健康檢查”的結論是既不支持，又不反對，即不在中華醫學檢驗雜志刊登此類文稿，也不再發表批判文章，因為“一滴血亞健康檢查”不屬于醫學檢驗的范疇。誠請會議的主持人查看會議記錄，以免混淆視聽。當然，放大30000－35000倍之說純糸不法商家的騙局。
二、超高倍顯微鏡是否提高了分辨力？
朱老師展示的公式d=0.61λ/(n×sinθ)是正確的，這是160多年前物理學家導出的關于顯微鏡分辨率的公式，至今沒有被推翻。但是，隨著科技的進步，公式中的λ（即光的波長）已經可以比較容易改變了，例如我們使用的白織燈光源，如果將它變成冷光源，就要將它的紅、橙、黃成份濾去，留下綠、藍、紫等成份，光的波長就縮短了，分辨力就有提高。如λ變成400um，分辨力不再是0.2um(100倍物鏡)，而是0.16um，如果λ變成350um，分辨力可以提高到0.14um。
另外，超高倍顯微鏡不僅僅是采用CCD或CMOS將顯微物像投影到屏幕上，它使用了二次放大技術，也即在放大器中加了一組透鏡組，經計算機顯示在屏幕上成了數字信號，它是實實在在的顯微放大。因為人眼的分辨力是0.1－0.2mm，盡管顯微鏡的分辨力達到了微米級，我們用目鏡觀察（100倍物鏡下），也只能分辨0.2um左右的質點距離。如果將物像再放大10倍，達到10000倍，那么距離0.05um的兩質點顯示在屏幕上是0.5mm，顯然人眼就可以分辨開來了。這種情況在目鏡下*大僅1000倍，兩質點顯示才0.05mm，所以無法分辨。它與d=0.61λ/(n×sinθ)公式無關，超高倍顯微鏡是基于這兩點而實現的。高清晰度是二次光學放大的前提，現今，提高顯微鏡分辨力還可采用其它技術，也不涉及d=0.61λ/(n×sinθ)公式。
三、關于泌尿生殖道病原微生物檢查
眾所周知，我國泌尿生殖道病原微生物約10余種，都有其形態學特征，例如：淋病雙球菌大多呈雙球形，成堆出現在白細胞、膿細胞或柱狀上皮細胞內 
，其它雙球菌則幾乎不成堆出現在細胞內，尤其不成堆出現在柱狀上皮細胞內。衣原體在柱狀上皮細胞胞漿內形成包涵體，并在生長周期達一定時刻向細胞外排放原體和網狀體，但胞漿和胞核完好無損，受感染細胞能繼續生存。這是其它病原微生物所不具有的特征。又如，人乳突瘤狀病毒感染鱗狀上皮細胞后，在細胞核內生長繁殖，*終形成挖空細胞。發現挖空細胞就提示乳突瘤狀病毒感染，挖空細胞是非常容易辨認的。單純皰疹病毒感染可出現細胞核的融合，有時成為巨核細胞。與之相類似的是巨細胞病毒感染，但它的特征是細胞核周環形包涵體，稱作“貓頭鷹眼征”。如此等等，都是前輩們長期觀察的經驗積累，早已總結成文，無須再行論證。
近年，美國TCT及TBS系統的介導文獻中均將這些特征作為病原微生物的診斷依據。然而，實踐證明，顯微鏡檢查泌尿生殖道病原微生物的陽性檢出率不高。取而代之是細菌培養、細胞培養、抗原抗體、單克隆、DNA、核酸技術等，這些檢查的敏感性和特異性是肯定的。不過，事物都有雙重性，沒有絕對的**，以衣原體檢查為例：我們知道，衣原體原體較廣泛地存在于人類生活的環境里，在一些特定的人群中，污染潔具的互用，不潔用水洗身以及公共游泳場所的消毒不嚴等，很可能出現衣原體原體傳播，但一般來說它只“寄居”在尿道前部或陰道，不一定侵入到較深的柱狀上皮細胞區域。這些人的前尿道或陰道標本中含有衣原體原體，用被認為是“金標準”的細胞培養時，同樣能培養出包涵體來。但是體外細胞培養出現包涵體，并不意味在被檢者體內也有包涵體，這就有可能給臨床診斷帶來困惑，光憑細胞培養陽性，能診斷是衣原體感染嗎？需要進行治療嗎？
人乳突瘤狀病毒（HPV）的DNA檢查也是這樣。據文獻介紹，人類是HPV**宿主，大部分人的一生，都有過HPV感染史。流行病學調查顯示，人體皮膚；特別是會陰部常常檢出HPV，所以各國婦科專家提出檢查HPV應該DNA與細胞學同時進行。加德納桿菌、白色念珠菌、單純皰疹病毒等的檢查也應如此。沒有在患者泌尿生殖道細胞內看到病原微生物或由微生物引起的細胞形態學變化，僅僅是細菌培養、細胞培養、抗原抗體、單克隆、DNA或核酸技術檢查等“陽性”，臨床醫生是不放心的。
針對傳統的顯微鏡下微生物與細胞形態學檢查，陽性檢出率低，費時、費事的缺陷，我們在大專院校和中科院等研究院所的支持下，歷時數年，耗費巨資，開發了超高倍顯微鏡下的泌尿生殖道“活細胞學檢查”。它包括：標本的取材方法與器具、制片方法與制片機、物像顯示與精確測量、細胞和微生物的識別與鑒別、計算機操作平臺與自動生成彩色圖文報告系統等部份。現在能做到在標本不染色的情況下，一張涂片即可同時檢查泌尿生殖道常見的全部病原微生物，包括：淋病雙球菌、梅毒螺旋體、白色念珠菌、加德納桿菌、滴蟲、支原體、衣原體、單純皰疹病毒、乳突瘤狀病毒、巨細胞病毒等。并且能夠明確告訴醫生，大部分微生物是在細胞內檢出的，有些可以判定是“活”的，可以在醫院PACS系統或局域網中提供給臨床AVI文件。*近，我們又成功地將宮頸細胞學檢查移植到超高倍顯微鏡下進行，開發了宮頸活細胞學檢查，包括細胞制片機和標本攪拌濾過瓶在內全部本土化，大大降低了宮頸癌篩查和女性婦科感染病變的檢查費用。
四、關于支原體問題
尿道標本中支原體采用超高倍顯微鏡檢查，國內有學者從事這一研究長達10多年之久。國際上早已公認解脲支原體能在細胞內生長、繁殖，所以采用超高倍顯微鏡檢查簡便、快捷，很容易與衣原體、皰疹類病毒區分開來，因為它不形成包涵體。把支原體作為機會致病菌或伴生病原體是正確的，臨床要求實驗室檢查可能仍然是必要的。如果認為超高倍顯微鏡不能檢查尿道標本中支原體，希望有一些實驗資料來證實國內學者曾經發表過的論文和實驗資料是錯誤的，這樣就更有說服力。1994年－1995年性學雜志有系列研究文章報導。
作為研究與開發必然要有一個逐步完善的過程，必然會有一些引起質疑和爭論的地方，正象朱老師指出的“國外至今也未有相關報導”，因此便沒有更多資料可以借鑒。還有些問題須要深入探討與求教，如朱老師提到的“布朗運動”，生物細胞內能產生布朗運動嗎？為什么經過一定時間后，這種細胞內的布朗運動會停止呢？它的運動軌跡符合愛因斯坦公式嗎？活的白細胞內溶酶體的運動也是布朗運動嗎？諸如此類，誠心希望更多專家、學者的參與、賜教。
*后，謝謝朱老師對超高倍顯微鏡的關心、愛護。
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